链霉素（Streptomycin）快速检测试剂盒

一、原理
本试剂盒采用间接竞争elisa方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物链霉素将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗链霉素抗体，加入酶标记物后，用tmb底物显色，样本吸光值与其所含残留物链霉素的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出相应残留物链霉素的含量。
二、试剂盒特性
试剂盒灵敏度： 0.5ppb
样本检测下限
鸡肉、鸡肝、牛奶—————————————20ppb
蜂 蜜/蜂王浆— —— — —— — —— —————10ppb
交叉反应率
链霉素    — — —— —— — — — — —— — —  100%
双氢链霉素  ——————— —— — — —— —108%
卡拉霉素  —— — — — — — — — — — — — —  < 1%
庆大霉素  — — —— — — — — — — — —— —   < 1%
回收率
牛    奶— —— —— —— —— —— —— —95±15%
鸡肉组织— —— —— —— —— —— —— —85±10%
蜂蜜/蜂王浆 — —— —— —— —— —— —75±15%
三、试剂盒组成
1、 微量测试孔：每条8孔，一板12条
2、 标准液×6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.5ppb、1.5ppb、4.5ppb、13.5ppb、40.5ppb
3、 酶标记物       7ml ……………… 红色帽
4、 抗体工作液     7ml ……………… 蓝色帽
5、 底物液 a液    7ml ……………… 白色帽
6、 底物液 b液    7ml ……………… 黑色帽
7、 终止液         7ml ………………黄色帽
8、20×浓缩洗涤液 40ml ……………… 白明帽
9、10×浓缩复溶液 50ml ……………… 透明帽
四、所用仪器、试剂
具备的仪器：微孔板、酶标仪、匀质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）
微量移液器：单道 20ul～200ul、100ul～1000ul多道 250 ul 
试    剂：浓磷酸、氢氧化钠、na2hpo4•12h2o、nah2po4•2h2o、正己烷
五、样本前处理步骤
样本处理前须知
处理任何样本时，都必须注意：
（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
（b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。
样本前处理需配制：
配液1、将浓缩复溶液用去离子水按1：9稀释（1份浓缩复溶液+9份去离子水）。
配液2、0.05m pb溶液
13.0gna2hpo4•12h2o+2.2gnah2po4•2h2o加去离子水定溶至1l。
配液3、0.04m磷酸溶液
1ml浓磷酸加去离子水定溶至360ml。
配液4、1m naoh溶液 
 称取4g naoh加去离子水定溶至100ml。
（a）牛奶样本的处理方法
1、 取牛奶1ml，按1:39稀释，混合30s。（50 ul牛奶+1950 ul稀释后的复溶液）
2、 取50ul用于分析。
稀释倍数：40
（b）鸡肉、鸡肝样本的处理方法
1、 取2±0.05g去除脂肪的匀浆样本与8ml0.05mpb缓冲液混合5min，置56℃水浴环境放置30min；
2、 室温4000r/min以上，离心10min；
3、 取1ml上清液加入1ml正己烷，充分混匀，室温4000r/min以上，离心5min
4、 去上层液体取50ul下层液，加入450ul 稀释后的复溶液混匀，混合30s；
5、 取50ul用于分析。
样本稀释倍数：40
（c）蜂蜜、蜂王浆：
1、 称量2±0.05g 样本加入4ml 0.04m磷酸，振荡至完全溶解，
2、 室温4000r/min以上，离心5min，直至清亮。（蜂蜜样本可不用离心直接进行第3步）
3、 加入450ul 1mnaoh将ph值调至7-9之间.(蜂王浆样本需将全部上清移至另一干净离心管中调节ph值至7-9之间)
4、 室温4000r/min以上，离心5min ，直至清亮。
5、 取50ul上清液，加入450ul稀释后的复溶液混匀，混合30s；
6、 取50ul用于分析。
稀释倍数：20       检测下限：10ppb
六、 酶标免疫分析程序:
 测定前应须知：
1、 使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20-25℃）。
2、 使用之后立即将所有试剂放回2-8℃。
3、 在elisa分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是elisa测定程序中的要点。
4、 在所有恒温孵育过程中，避免光线照射,用盖板膜盖住微孔板。
操作步骤：
1、 从4℃冷藏环境中取出所需试剂，置室温（20-25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、 取出需要数量的微孔及框架，将不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、 配液：将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水按照1：19稀释（1份浓缩洗涤液+19份去离子水），或按所需用量配制洗涤液。
4、 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5、 加标准品/样本50µl/孔，然后加酶标记物50μl/孔，再加入抗体工作液50µl/孔。轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板，37℃环境反应40min。
6、 取出用洗涤液按每孔250ul，洗板4－5次，每次浸泡15-30秒，拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。
7、 显色：每孔加入底物a液50ul，再加底物b液50ul，轻轻振荡混匀，37℃环境中避光显色20min。
8、 测定：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，在5min内读完数据），测定每孔od值。
七.结果判定
结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含链霉素量成负相关。
1、粗略判定：
用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ng/ml)。假设样本1的吸光度值为0.3，样本2的吸光度值为1.0，标准液吸光度值分别是：0ppb为2.243；0.5ppb为1.816；1.5ppb为1.415；4.5ppb为0.74；13.5ppb为0.313；40.5ppb为0.155。则样本1的浓度范围是13.5ppb-40.5ppb;样本2的浓度范围是1.5ppb-4.5ppb，乘以其对应的稀释倍数即为样本中链霉素实际浓度。
2、定量分析
（1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，即
百分吸光度值（%）＝ b ×100%
b—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
b0—0µg/l标准溶液的平均吸光度值
（2）标准曲线的绘制与计算
以标准品百分吸光率为纵坐标，以链霉素标准品浓度（µg/l）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中链霉素实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）
八、 注意事项
1、 室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20-25℃）会导致所有标准的od值偏低。
2、 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、 试剂混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。
4、 反应终止液为2m硫酸，避免接触皮肤。
5、 不要使用过了有效期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度、od值的变化。不要交换使用不同批号的盒中试剂。
6、 将不用的微孔板放进自封袋重新密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、 试剂变质的迹象
显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5（a450nm<0.5 ）时，表示试剂可能变质。
8、 加a、b 液后一般显色20min即可，若颜色较浅，可延长显色时间，但不能超过30min。
9、 该试剂盒最佳反应温度为37℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
九、储藏条件和保质期
储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，不要冷冻。
保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒。
提示：酶标板真空包装袋若有漏气，酶标板仍然正常有效，不影响实验结果，请放心使用。

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苏州艾瑞德生物科技有限公司销售部
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东吴北路31号吴中科技创业园B幢201室

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