DNA快速连接试剂盒

概述：
 dna快速连接试剂盒显著缩短了dna连接反应的时间。在室温(25°c)条件下，使用dna快速连接试剂盒，5分钟即可完成dna片段粘性末端或平滑末端的连接反应。
 应用：
1. 载体构建。
2. 文库构建。
3. ta克隆。
4. linker的连接。
5. 线形dna的再环化。
 质量检测：
 本产品已按下述步骤检测转化效率：
pet28a载体经ecorv消化 (平滑末端) 或hindiii消化 (粘性末端) 后，cip处理，回收纯化。
pbr322dna经haeiii消化产生的平滑末端插入片段和λdna经hindiii消化产生的粘性末端插入片段，采用快速连接步骤，分别以3:1 (插入片段 : 载体) 的比例与同样酶切的pet28a载体相连接。连接产物的转化方法 (详见下文)。
每批产品检验均达到下面的标准：
转化效率(转化子/μg)
载体再环化
插入片段的连接
粘性末端
>5×106
>1×106
平滑末端
>2×106
>1×106
未切割载体
2×107
质保声明：
 dna快速连接试剂盒经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
 快速连接步骤:
 1. 混合50ng载体和3倍摩尔量的插入片段，用蒸馏水调整总体积为10 μl。
2. 加入10 μl 2× 快速连接酶反应缓冲液，混匀。
3. 加入1 μl快速t4 dna连接酶，彻底混匀。
4. 室温 (25°c) 作用5分钟。
5. 冰上冷却，然后转化或贮存于-20°c。
6. 不要热失活，热失活会急速剧降低转化效率。
 转化步骤：
 快速连接产物可通过几种不同的方法进行转化，推荐转化方法如下：
1. 冰上融化感受态细胞。
2. 在1.5 ml微量离心管中，冷却约5 ng (2 μl) 的连接混合物。
3. 在dna样品中加入50 μl感受态细胞，通过反复吹吸温和混匀样品。
4. 冰上放置30分钟。
5. 42°c热休克30秒*，冰上冷却2分钟。
6. 加入950 μl室温培养基*，37°c温育1小时。
7. 取100 μl样品铺在适宜的固体培养基上。
8. 37°c培养过夜。
[*]：热休克的时间和温度以及复苏的过程请遵循感受态细胞说明书。

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天津强微特生物科技有限公司
李冠军
13642033949
天津南开区华苑产业园区工房时代Ⅱ期C座331室

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